簡介： 抗雙鏈 DNA 抗體；天然 DNA 抗體(dsDNA-Ab）是一組抗核抗體 （ANA）， 其目標抗原是雙鏈 DNA。它們對系統性紅斑狼瘡（SLE）有很 強的診斷性， 并與狼瘡腎炎的發病機制有關。其生成源于免疫系統對自身 DNA的錯誤識別，導致抗體與dsDNA結合，形成免疫復合物，進而引發炎 癥反應和組織損傷。dsDNA-Ab是SLE的特異性血清學標志物，其水平與疾 病活動度密切相關，尤其在狼瘡性腎炎等嚴重并發癥中具有重要診斷價值。 通過動態檢測dsDNA-Ab水平，可評估治療效果、預測疾病復發風險，并指 導個體化治療。
實驗原理： 本試劑盒采用間接法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被有雙鏈DNA； 天然DNA抗原的微孔中，依次加入樣本、標準品、HRP標記的二抗，中間經 過溫育和洗滌，用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶(HRP)的催化下轉化成 藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣本中的小鼠抗雙 鏈DNA抗體;天然DNA抗體(dsDNA-Ab)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下 測定吸光度（OD值），計算樣本濃度。
靈敏度：0.193ng/mL
特異性：可檢測樣本中小鼠的dsDNA-Ab，且與其類似物無明顯交叉反應。
樣本稀釋方案：
請提前預估樣本的濃度范圍，如果您的檢測樣本需要稀釋，參考稀釋方案如下：
稀釋100倍：一步稀釋。取5μL樣本到495μL通用稀釋液內，做100倍稀釋；
稀釋1000倍：兩步稀釋。取5μL樣本到95μL通用稀釋液內，做20倍稀釋， 再取5μL20倍稀釋樣本到245μL通用稀釋液內，做50倍稀釋，總共稀釋 1000 倍；
稀釋100000 倍：三步稀釋。取5μL樣本到195μL通用稀釋液內，做40倍稀 釋，再取5μL40倍稀釋樣本到245μL通用稀釋液內，做50倍稀釋，最后取5 μL 2000 倍稀釋樣本到245μL通用稀釋液內，做50倍稀釋，總共稀釋100000 倍； 每步稀釋時取液量不少于3μL，稀釋倍數不超過100倍。每步稀釋都需混合均 勻，避免起泡。
實驗所需自備試驗器材：
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度移液器及吸頭：0.5-10μL、5-50μL、20-200μL、200-1000μL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
檢測前準備工作：
1. 請提前 10 分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。
2. 標準品梯度工作液配制：加入 1mL 通用稀釋液至凍干標準品中，靜置15 分鐘待其完全溶解后輕輕混勻(濃度為25ng/mL)，然后按照以下濃度： 25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.12ng/mL、1.56ng/mL、0.78ng/mL、 0.39ng/mL、0ng/mL進行稀釋。 倍比稀釋方法：取7支EP管，每管中加入500μL通用稀釋液,25ng/mL 的標 準品工作液中吸取500μL到第一支EP管中混勻配成12.5ng/mL 的標準品工 作液，按此步驟往后依次吸取混勻。最后一管直接作為空白孔，不需要再 從倒數第二管中吸取液體，
3. HRP-二抗工作液配制：使用前15分鐘將100×濃縮HRP-二抗于1000×g 離心1分鐘，以通用稀釋液將100×濃縮HRP-二抗稀釋成1×工作濃度(例： 10μL濃縮液+990μL通用稀釋液)，現配現用。
4. 1×洗滌液配制：取10mL 20×洗滌液到190mL蒸餾水中（從冰箱中 取出的濃縮洗滌液可能有結晶，屬于正常現象，可放置室溫，待結 晶完全溶解后再配制)
典型數據及參考曲線
由于實驗操作條件的不同（ 如操作者、移液技術、洗板技術和穩定條件等），標準曲線的OD值會有所差異。以下數據和曲線僅供參考，實驗者需根據自己的實驗建立標準曲線。
| 濃度（ng/mL) | 25 | 12.5 | 6.25 | 3.12 | 1.56 | 0.78 | 0.39 | 0 |
| OD值 | 2.52 | 1.96 | 1.38 | 0.96 | 0.55 | 0.31 | 0.19 | 0.08 |
| 校正OD值 | 2.44 | 1.88 | 1.3 | 0.88 | 0.47 | 0.23 | 0.11 |
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注意：本圖僅供參考，應以同次試驗標準品所繪標準曲線計算標本含量。
