1. 預期用途
本試劑盒用于檢測人血清、血漿等樣本中的森林腦炎病毒 IgM 抗體，僅供研究使用，不得用于診
斷。
2. 檢測原理
試劑盒采用捕獲法原理：將抗人 IgM 抗體包被于酶標板上，加入樣品，樣品中的 IgM 抗體被捕獲，
結合形成“抗μ-IgM 抗體”免疫復合物，清洗去除游離的雜質，再加入 HRP 標記的酶標記的抗
原，形成“抗μ-IgM 抗體-酶標抗原”復合物，清洗去除多余的酶標抗原，加入 TMB 顯色，再加
入終止液，用酶標儀在 450 nm 處測 OD 值，顏色的深淺和樣品中的待測抗體的濃度呈正比。
4. 需要但未包含的實驗材料
· 蒸餾水或去離子水，一次性離心管、一次性手套等耗材；
· 移液器、多通道移液器及配套槍頭；
· 燒杯、量筒、試劑瓶等容器具；
· 用于封貼微孔板的封板膜或其他替代材料；
· 微孔板振蕩器（如有需要）、離心機、旋渦振蕩器等輔助設備；
· 恒溫培養箱、恒溫水浴箱、酶標儀、洗板機。
5. 試劑的準備及儲存
· 試劑盒各組分應儲存于 2~8℃保存；
· 使用前請確保試劑盒按規定的條件儲存，每次實驗僅準備所需實驗用量的試劑；僅供科研使用，不得用于診斷
· 1×洗液的配制：濃縮洗液（20×）如有晶體析出，需在 37℃下加熱至晶體全部溶解后使用。
用蒸餾水 1:20 稀釋，例如：10mL 濃縮洗滌液加入 190mL 的蒸餾水，混合均勻。配制好的洗
液可以在室溫保存 1 周；
6. 樣品采集、預處理及儲存
下面列出的樣品收集和儲存條件旨在作為一般性指導，不同類型樣品的儲存、使用穩定性尚
未完全評估。
· 血清：使用血清采集管采集全血，室溫靜置待血細胞凝集后取的血清，或直接在 1000×g 下離
心 15 分鐘取得血清。操作應柔和，避免溶血發生。獲取的血清應及時進行檢測，如不能及時
進行檢測，應等分為多份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過 6 個月，冷凍儲存
血清樣品凍融不超過 2 次。
· 血漿：使用 EDTA 或肝素采血管收集血漿。全血采集后以 1000×g 離心 15 分鐘取得血漿。操
作應柔和，避免溶血發生。獲取的血漿應及時進行檢測，如不能及時進行檢測，應等分為多
份，儲存在-20℃及以下溫度條件，儲存時間不超過 6 個月，冷凍儲存血漿樣品凍融不超過 2
次。
· 不能檢測含疊氮鈉、懸浮纖維蛋白或聚集物、重度溶血樣品。
· 樣品應無微生物污染。
7. 實驗步驟
使用前將所有試劑置于室溫平衡 30 分鐘左右，也可置于 37℃溫箱快速回溫至室溫。
注意：酶標板未恢復室溫前，請勿開封。
1
合理安排陽性對照孔、陰性對照孔、空白孔、樣品孔。
2
陽性對照孔加入陽性對照 100uL，陰性對照孔加入陰性對照 100uL。陰陽對照各設
置 3 孔。
3
樣本孔先加入樣品稀釋液 100uL，再加入樣本 10uL。
空白孔不加樣品不加酶，其余操作與樣品孔相同。
4
蓋上封板膜，在 37℃下孵育 30 分鐘。
5
洗板 5 次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標板，在干凈的吸水紙上拍干。
6
每孔加入酶標記物 100μL。
7
蓋上封板膜，在 37℃下孵育 30 分鐘。
8
洗板 5 次，最后一次洗板后棄去殘留洗液，倒扣酶標板，在干凈的吸水紙上拍干。
9
每孔加入顯色劑 100uL。
10
37℃下避光孵育 15 分鐘。
11
每孔加入終止液 50μL。
12
使用酶標儀在 450nm 檢測波長及 620~690nm 參比波長條件下測定吸光度值，如果
沒有參比波長則僅選擇 450nm 波長進行檢測。如果最高濃度校準品 OD 值過高，
應立即在 405/630nm 雙波長條件下檢測。
8. 陽性判斷值 Cut-Off
Cut-Off =陰性對照孔平均 OD 值×2.1（陰性對照孔 OD 均值小于 0.050 時，按 0.050 計算）。
例：陰性對照孔平均 OD 值為 0.100，則 Cut-OFF 值=0.100×2.1=0.210；
陰性對照孔平均 OD 值為 0.020，則 Cut-OFF 值=0.050×2.1=0.105。僅供科研使用，不得用于診斷
9. 結果判斷
陽性結果：樣本 OD 值＞Cut-OFF 值，結果判為陽性；
陰性結果：樣本 OD 值≤Cut-OFF 值，結果判為陰性；
10. 檢測的局限性
樣本濃度低于檢出限時，檢測結果無法進行準確判斷。本試劑為定性試劑，不能作為定量試劑使
用。
11. 產品性能指標
以下結果基于校準品的濃度值實驗得出，未納入基質效應等其他因素的潛在影響。
檢測 3 份企業陽性參考品，結果均為陽性。檢測 3 份企業陰性參考品，結果均為陰性。
精密度：板內精密度 CV＜10%（N=20），板間精密度 CV＜15%（N=20）。
特異性（Analytical specificity）：其他相關因子在稀釋緩沖液中制備為 10μg/mL 測定，沒有觀察
到明顯的交叉反應。
12. 注意事項
· 試劑盒內所有成分僅供研究使用！
· 終止液含稀硫酸，具有腐蝕性，應謹慎操作。
· 試劑盒成分含防腐劑、蛋白成分等，可能引起皮膚過敏反應，應佩帶口罩避免吸入薄霧。
· 顯色劑、濃縮洗液可能引起皮膚、眼睛和呼吸道刺激，應佩帶口罩避免吸入薄霧。
· 佩戴防護手套、防護服、眼睛和面部防護用品，實驗操作后徹底洗手。
13. 技術要點
· 不同批次的試劑盒不能混用，不建議將不同板上的微孔板條組裝在一塊板上檢測，盡管是同
一批次試劑，也可能存在板與板之間的差異。
· 每次實驗時應當始終配制標準曲線平行檢測，不能將上一次的標準曲線用于下一次實驗結果
的計算。
· 不要使用超過有效期的試劑盒進行檢測。
· 底物顯色劑應當為無色，如變藍表明已變質，不能應用于實驗。
· 使用適當的封板膜密封微孔板條，以便檢測結果更加可靠。
· 操作時盡量避免產生氣泡。不要將不同試劑瓶的瓶蓋交叉使用。
· 應當遵循說明書的操作進行實驗，不按照說明書的操作將導致實驗結果的變化，任何不遵循
說明書的實驗操作應當事先詢問售后技術支持的建議。否則我們不保證實驗結果的可靠。
