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谷氨酰胺合成酶(GS)活性檢測試劑盒

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檢測方法 微量法

 

測定意義:GS(EC 6.3.1.2)主要存在于植物中,是生物體內氨同化的關鍵酶之一,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺,不僅可以防止過多的銨離子對生物有毒性,而且谷氨酰胺也是氨的主要儲存和運輸形式。

測定原理:GS在ATP和Mg2+存在下,催化銨離子和谷氨酸合成谷氨酰胺;谷氨酰胺進一步轉化為γ─谷氨酰基異羥肟酸,在酸性條件下與鐵形成紅色的絡合物;該絡合物在540nm處有最大吸收峰,可用分光光度計測定。

需要的儀器,耗材:可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

 

一、樣本測定的準備

1、 細菌、細胞或組織樣品的制備:

細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為500~1000:1 的比例(建議500 萬細菌或細胞加入1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30 次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10 的比例(建議稱取約0.1g 組織,加入1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。

2、 血清(漿)樣品:直接檢測。

 
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